リガンドの結合および誘導されたGPCRシグナル伝達は、セカンドメッセンジャー分子を検出することで研究可能です。GαsまたはGαi共役GPCRはcAMP経路を活性化し、細胞内cAMPの蓄積を刺激または阻害します。Gαq共役GPCRはPLC経路を活性化し、カルシウムの放出を誘導します。セカンドメッセンジャーアッセイは、アゴニストおよびアンタゴニスト両方の測定とキャラクタライゼーションを可能にします。
カルシウムアッセイ
GPCRは、リガンド結合後にセカンドメッセンジャーとしてカルシウムを放出するPLC経路を誘導できます。GenScriptが提供するGPCR細胞株の大部分は、測定とキャラクタライゼーションにカルシウムアッセイを使用できます。これらには、Gαq共役GPCR細胞株、およびGα15を共発現するGαsまたはGαi共役GPCR細胞株が含まれます。
図1： GLP-1RおよびGα15共発現CHO-K1 細胞（GenScrip, Cat. No. M00451）における細胞内カルシウム流動の、GLP-1 (7-37)誘導性濃度依存性刺激
図2：NK1発現CHO-K1細胞（GenScript, Cat. No. M00199）における細胞内カルシウム流動の、サブスタンスP誘導性濃度依存性刺激
cAMPアッセイ
GαsまたはGαi共役GPCR細胞株は、リガンド結合後にセカンドメッセンジャーとしてcAMPを使用するcAMP経路を誘導します。cAMPアッセイは、GPCRとそのリガンドの結合測定とキャラクタライゼーション向けの、シンプルかつ分かりやすい方法です。
図3: D1発現CHO-K1細胞（GenScript, Cat. No. M00247）における、ドーパミン用量依存的な細胞内cAMP流動の刺激
