eBlot™ L1動画
eBlot™ セットアップ動画
eBlot™ L1システムは、ミニゲルからのPVDFあるいはニトロセルロースメンブレンへのウェットエレクトロブロッティング用です。eBlot™ L1が提供する、トップ品質で迅速なタンパク質転写を享受してください!
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従来のウェット転写は煩雑で、経験と、消耗品の準備に多くの時間を費やす必要があります。転写時間は通常、1時間から一晩までと変化します。eBlot™高速ウェット転写システムでは、スピードを犠牲にせず、優れた転写効率を実現します。
eBlot™ L1では、同時に1つまたは2つのミニゲルの、高速で効率的な転写が可能です。セットアップは2分未満で、当社の簡単に組み立てられるドライスポンジサンドイッチで、従来のウェット転写の煩雑さを避けられます。
当社のカスタマイズ可能なプロトコルは、お客様の研究に最適な柔軟性をもたらします。ユニットは大きなタンパク質(最大400 kD)または小さいサイズのタンパク質(最大100 kD)へ短い転写時間を選択した場合に設計された、標準プロトコルが付いてきます。
Wet Transfer | Competitor A | Competitor B | eBlot™ L1 | |
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EGFR (170 KD; from left to right: 20 µg, 10µg, 5µg, 2.5 µg, 1.25 µg) | ||||
Taq (93 KD; from left to right: 125 ng, 62.5 ng, 31.2 ng, 15.6 ng, 7.8 ng) | ||||
GAPDH (36 KD; from left to right: 10 µg, 5 µg, 2.5 µg, 1.25 µg, 0.25 µg) |
様々な転写システムによるブロッティング効率の比較。従来のウェット転写、他社製品A、他社製品B、およびGenScriptのeBlot™ L1で、3つの異なるタンパク質をPVDFメンブレンにトランスファーした。ロードしたタンパク質の量は、EGFRは1.25 µg~20 µg、Taqは7.8 ng~125 ng、GAPDHは0.6 µg- 10µg の範囲とした。3つ全てのタンパク質で、eBlot™ L1は他のシステムと比較して、優れた転写効率を示した。高効率な転写により、Taqはわずか7 ng(レーン5)、EGFRでは20 µgまで(レーン1)のタンパク質濃度で、鮮明に可視化できた。
「これらのような高速転写装置の一つを利用したのは、今回が初めてです。テストを決めた理由は、古典的な転写システムを使用する場合でも大きな複合体の転写効率が低いセミドライではなく、ウェット転写システムを使用しているからです。」
「私たちの主な目的は、200 kDaから数メガダルトンの範囲の大きな膜埋め込み型マクロ構造である集合体ミトコンドリア酸化リン酸化複合体と超複合体の転写を最小限にすることでした。」
-Dr. Antoni Barrientos,Ph.D.
University of Miami Miller School of Medicine
* 図はUniversity of Miami School of MedicineのDr. Alba-Timon-Gomezおよび Dr. Antoni Barrientosより提供されました。
GenScriptのeBlot™高速・効率ウェット転写を使用した、ミトコンドリア呼吸鎖複合体と超複合体のブルーネイティブ(BN)-PAGE解析
非ターゲティング(NT)または複合体IV集合体に関与する特定の遺伝子をターゲットするsiRNAで処理した、ジキトニン存在下で調製したHEK293T細胞の細胞抽出物を、3~12%のネイティブグラディエントポリアクリルアミドゲルにロードし、BN-PAGEで分離した。電気泳動後、タンパク質はGenScriptのeBlot™ L1タンパク質転写システムを用いて24分でPVDFメンブレンに転写した。ミトコンドリア呼吸鎖複合体と超複合体を可視化するために、続いてメンブレンをCOX5B(複合体IVサブユニット)、CORE2(複合体IIIサブユニット)、およびSDHS(複合体IIサブユニット)に対する抗体で染色した。