GMP Cas9ヌクレアーゼ

厳格な製造・製品化基準

• 製造仕様

  Test
  		GenCRISPR™ Ultra Cas9 and eSpCas9 Nucleases
  		GMP Grade*	Basic GMP Grade**	RUO Grade
  Facility		GMP Compliant	Non-GMP Compliant	Non-GMP Compliant
  cGMP Guidelines		+++	++	+
  ISO9001		/	/	+++
  ISO13485		+++	+++	/
  Quality Control		+++	+++	+
  Documentation		+++	++	+

  注：
  *GMP GradeとはGenScript が GMP 準拠施設で製造された Cas9 ヌクレアーゼを説明するために使用する特定の用語です。現行適正製造基準 (cGMP) のガイドライン、ISO 13485 品質管理システム規格に準拠し、厳格なプロセス管理と完全な文書記録を備えています。GenScriptは、特定の地域において、お客様のプロジェクトを支援するための文書化、サイト監査、およびその他サポートを提供いたします。
  
  ** Basic GMP Gradeとは、GenScriptがISO13485品質管理システム基準、より厳密なプロセス管理、比較的完全な文書記録に従って製造された試薬を説明するために使用する、ブランディングした用語です。GenScriptは、特定の地域において、お客様のプロジェクトを支援するための文書化、サイト監査、およびその他サポートを提供いたします。
  

• 出荷基準

  Test
  		GenCRISPR™ Ultra Cas9 and eSpCas9 Nucleases
  		GMP Grade	Basic GMP Grade	RUO Grade
  Concentration		10.0 mg/mL±10%	10.0 mg/mL±10%	10.0 mg/mL±10%
  Appearance		Clear, colorless	Clear, colorless	Clear, colorless
  Purity	SDS-PAGE	≥ 95 %	≥ 95 %	≥ 90 %
  	SEC-HPLC	≥ 95 %	≥ 95 %	≥ 95 %
  Activity		≥ 90 % (SpCas9) ≥ 85 % (eSpCas9)	≥ 90 % (SpCas9) ≥ 85 % (eSpCas9)	≥ 90 % (SpCas9) ≥ 85 % (eSpCas9)
  Endotoxin		< 10 EU/mg	< 10 EU/mg	< 10 EU/mg
  Residual DNase		≤ 10 ng/mg	≤ 10 ng/mg	Non-detectable Qualitative Method
  Residual RNase		≤ 1 ng/mg	≤ 1 ng/mg	Non-detectable Qualitative Method
  Residual HCP		< 10 ng/mg	< 10 ng/mg
  Residual HCDNA		≤ 1 ng/mg	≤ 1 ng/mg
  Mycoplasma		< LOD	< LOD
  Sterility		Sterile	Sterile

事例集

• Cas9 ヌクレアーゼのグレード間ノックアウト効率の均質性 (プライマリーT細胞)
  

  図1：basic GMPおよび研究グレードGenCRISPR™ Ultra Cas9または GenCRISPR™ Ultra eSpCas9を使用し、

  エレクトロポレーションによりプライマリーT細胞のTRACをノックアウト GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-Research（Cat. No. Z03621）、 GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-basic GMP（Cat. No. Z03623）、GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP （Cat. No. Z03623-GMP）または GenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-Research（Cat. No. Z03622）、GenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-basic GMP（Cat. No. Z03624）、GenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP（Cat. No. Z03624-GMP）とsgRNA（GenScriptのCRISPRsgRNA合成サービスで作製）をエレクトロポレーションにより細胞にトランスフェクションし、ヒトTRAC遺伝子をノックアウトした。トランスフェクションおよび細胞培養後、TRACノックアウト効率をフローサイトメトリーで測定した。GMP、basic GMPおよび研究グレードGenCRISPR™ Ultra Cas9または GenCRISPR™ Ultra eSpCas9いずれにおいても一貫した高い遺伝子編集効率を示した。

  Cell Type:	Primary T cells
  Transfection Method:	Electroporation
  Target Gene:	TRAC
  Cell amount:	1.0 x 106 cells
  Cas9:sgRNA ratio:	1:2
  RNP amount:	25 pmol

• 様々なエレクトロポレーションスケールで一貫した高い編集効率(プライマリーT細胞)
  

  図2： GMPグレード GenCRISPR™ Ultra Cas9または GenCRISPR™ Ultra eSpCas9を、プライマリーT細胞へ様々なスケールでエレクトロポレーションし、TRACをノックアウト

  GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP（Cat. No.　Z03623-GMP）、 GenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP （Cat. No.　Z03624-GMP）または他社Cas9 ヌクレアーゼと、sgRNA（GenScriptのCRISPR sgRNA合成サービスで作製）を20 μl また100 μlのスケールでエレクトロポレーションし、トランスフェクションした。 細胞培養後、TRACノックアウト効率をフローサイトメトリーで測定・解析した。本データは、GMP Grade GenCRISPR™ Ultra Cas9およびGenCRISPR™ Ultra eSpCas9は、異なるエレクトロポレーションスケールでも一貫して高い編集効率を示した。

  Electroporation Scale	20 μl	100 μl
  Cas9 nuclease amount	4 μg	20 μg
  Cell amount	1.0 × 106	5.0 × 106
  Cas9: sgRNA (molar ratio)	1:2	1:2
  RNP amount	25 pmol	125 pmol

• GMP Grade GenCRISPR™ Ultra Cas9 およびUltra eSpCas9を使用した、プライマリーT細胞における高いノックイン効率
  

  図3：プライマリーT細胞のTRAC部位へ、GMP Grade GenCRISPR™ Ultra Cas9またはGenCRISPR™ Ultra eSpCas9を使用して、エレクトロポレーションでGFP遺伝子をノックイン

  GMP Grade GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP（Cat. No. Z03623-GMP）またはGenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP（Cat. No. Z03624-GMP）と、sgRNA（GenScriptのCRISPR sgRNA合成サービスで作製）、および二本鎖DNA HDRテンプレート（GenScriptのHDRドナーテンプレート合成サービスで作製）を、エレクトロポレーションでトランスフェクションした。細胞培養後、遺伝子ノックイン効率をフローサイトメトリーで測定・解析した。GenScriptのGenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP（Cat. No. Z03623-GMP）およびGenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP（Cat. No. Z03624-GMP）は、プライマリーT細胞において高い遺伝子ノックイン効率を示した。

  Cell Type:	Primary T cells
  Transfection Method:	Electroporation
  Target Gene:	TRAC
  Gene Knocked-in:	GFP
  Cell amount：	1.0 x 106 cells
  Cas9:sgRNA ratio:	1:2
  RNP amount:	25 pmol

• GMP Grade GenCRISPR™ Ultra Cas9 およびUltra eSpCas9の細胞株における高いノックアウト効率
  

  図4：GenCRISPR™ Ultra SpCas9または GenCRISPR™ Ultra eSpCas9をJurkat細胞にエレクトロポレーションでトランスフェクションし、CIITA、GM-CSFおよびTGFBR2をノックアウト

  Jurkat細胞に、GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP （Z03623-GMP）またはGenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP（Z03624-GMP）もしくは他社の野生型Cas9タンパク質と、sgRNA（GenScriptのCRISPR sgRNA合成サービスで作製）をエレクトロポレーションでトランスフェクションし、ヒトCIITA、GM-CSF、TGFBR2遺伝子をノックアウトした。細胞培養後、遺伝子編集効率をサンガーシークエンシングで解析した。GenCRISPR™ Ultra NLS-SpCas9-GMP（Z03623-GMP）およびGenCRISPR™ Ultra eSpCas9-2NLS-GMP（Z03624-GMP）の両方で、高い遺伝子ノックアウト効率を示した。

  Cell Type:	Jurkat cells
  Transfection Method:	Electroporation
  Target Gene:	CIITA, GM-CSF and TGFBR2
  Cell amount:	0.5 x 106 cells
  Cas9:sgRNA ratio:	1:3
  RNP amount:	7.5 pmol

関連リソース

CRISPR RNP User Manual

A guide on how to use GenScript's RNP products for targeted genome editing

無料ダウンロード

CRISPR RNP Handbook

Enabling RNP-mediated CRISPR gene editing and transforming life science research

無料ダウンロード

Cas9 and sgRNA Protocol

Simple protocol for CRISPR gene editing using GenCrisprTM Cas9 nuclease

無料ダウンロード

GenCRISPR gRNA Design Tool

Interactive CRISPR guide RNA design tool

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GenCRISPR™ Gene Editing Solutions

All solutions you need for a successful CRISPR gene editing project

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