MonoRab™ 抗VHH抗体

製品リスト

• 抗ラクダ科VHHモノクローナル抗体

  カタログ番号	タンパク質名前	納品量	価格	注文
  A01860	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody, mAb		- 200 μl
  A01861	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody [HRP], mAb		- 200 μl
  A01862	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody [iFluor488], mAb		- 200 μl
  A01863	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody [iFluor555], mAb		- 200 μl
  A01994	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody [iFluor 647], mAb		- 200 μl
  A01995	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Antibody [Biotin], mAb		- 200 μl

• 抗ヒト化VHHモノクローナル抗体

  カタログ番号	タンパク質名前	納品量	価格	注文
  A02165	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody, mAb		- 200 μl
  A02166	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody [Biotin], mAb		- 200 μl
  A02167	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody [HRP], mAb		- 200 μl
  A02168	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody [iFluor 488], mAb		- 200 μl
  A02169	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody [iFluor 555], mAb		- 200 μl
  A02170	MonoRab™ Rabbit Anti-Humanized VHH Antibody [iFluor 647], mAb		- 200 μl

• 抗ラクダ科VHHモノクローナル抗体カクテル

  カタログ番号	タンパク質名前	納品量	価格	注文
  A02014	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail		- 200 μl
  A02015	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [Biotin]		- 200 μl
  A02016	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [HRP]		- 200 μl
  A02017	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [FITC]		- 200 μl
  A02018	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [PE]		- 200 μl
  A02019	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [iFluor 647]		- 200 μl
  A02020	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [iFluor 555]		- 200 μl
  A02021	MonoRab™ Rabbit Anti-Camelid VHH Cocktail [iFluor 488]		- 200 μl

Selection Guide

• ラクダ科VHHとの結合親和性
  

  図1　 MonoRab™ 抗ラクダ科VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A01860）およびMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02014）の、ラクダ科VHHへの結合親和性の比較。カクテル抗体（Cat. No. A02014）は幅広く反応し、VHH抗体スクリーニングの使用に理想的。ほとんどの場合、モノクローナル抗体（Cat. No. A01860）は、その低交差反応性によってより強い親和性を示す。標識用またはバックグラウンドを最小化させるためには、A01860を使用。

• ヒト化VHHとの結合親和性

  治療のアプリケーションでは、ヒトにおける免疫原性および抗薬物抗体（ADA）発生リスク削減のために、ラクダ科VHHをヒト化する必要があります。ヒト化の結果、いくつかの抗ラクダ科VHH抗体はヒト化VHHを認識できなくなります。GenScriptはヒト化VHHを認識する抗体を提供しています。

  

  図2 MonoRab™ 抗ヒト化VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A02165）、 MonoRab™ 抗ラクダ科VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A01860）、および MonoRab™ 抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル （Cat. No. A02014）と、ヒト化VHHとの結合親和性の比較。A02165の性能が最も良く、ヒト化VHH抗体検出の使用に理想的である。

アプリケーション

• フローサイトメトリーによるVHHベースJurkat-CAR細胞の検出

  そのサイズの小ささと高い特異性により、リコンビナントVHHコンストラクトはCAR-T療法のような治療アプリケーションでの使用がますます拡大しています。患者、動物モデルおよび細胞培養におけるVHHの追跡には、特異的な抗VHH抗体が必要です。フローサイトメトリー等の技術は改変T細胞の研究に使用され、また細胞をソーティングしてダウンストリームアプリケーションに使用されます。

  GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体は、VHHベースCAR-T細胞に高い特異性を示します。これらは図3に示されるように、サンプル中のVHHベースCAR-T細胞の量を正確に検出できます。MonoRab™抗VHHウサギ抗体は、磁気ベース活性化セルソーティングにより、CAR-T細胞の測定とソーティング（図4）にも使用できます。

  

  図3 上述のデータは、段階希釈したPE 標識MonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No.A02018）をJurkat細胞およびサンプル中に20%含まれるVHHベースJurkat-CAR細胞と結合させ、フローサイトメトリーによって評価したデータである。CAR-T療法の進展に伴って、VHHはCARの作製によく使用されている。A02018はVHHベースJurkat-CAR細胞に優れた結合活性を示す。CAR-T細胞の検証と測定に使用される。

  

  図4 ビオチン標識MonoRab™抗ラクダ科VHH抗体カクテル（Cat. No. A02015）および抗ビオチン磁気ナノビーズ（ミルテニー社）を使用し、磁気ベース活性化セルソーティングでVHHベースCAR-T細胞をソーティングした。またナイーブT細胞をネガティブコントロールとした。CAR-T細胞をiFluor 555標識MonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02020）で染色し、フローサイトメトリーで解析した。

  図のように、陽性CAR-T細胞の割合は、磁気ベース活性化セルソーティングでの細胞分離後に約10%から90%に増えた。A02015 はCAR-T細胞のMACSでの分離に理想的である。

• 免疫蛍光法（IF）および免疫組織化学 （IHC）による、組織中に浸潤したVHH形質導入CAR-T細胞の検出

  CAR-T細胞療法は、進行した白血病等のいくつかの種類のがん根絶に成功していますが、固形腫瘍の治療におけるその有効性は限定されています。その主な理由は、固形腫瘍の物理的な障壁によるCAR-T細胞浸潤の失敗です。より高い有効性に向けたCAR-T細胞の最適化には、CAR-T細胞の分布を検出することが重要です。さらに、CAR-T細胞の分布は、発生しうる副作用の予測に必要な情報を提供します。正常組織における腫瘍抗原の非特異的発現は、CAR-T細胞によって引き起こされる正常組織傷害の可能性を高めます。

  GenScriptのMonoRab™抗ラクダ科VHH抗体カクテルは、NCGマウス脾臓（図5）およびPDXマウス肝臓（図6）中の浸潤したVHH形質導入CAR-T細胞と特異的に結合し、免疫蛍光法および免疫組織化学解析によってCAR-T細胞の組織中分布の解析に役立ちます。

  

  図5 NCGマウス脾臓に浸潤した、VHH形質導入CAR-T細胞の免疫蛍光法解析。VHHは、0.5 µg/mL のMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02014）、および1/500（4 μg/mL）のAlexa Fluor 488標識抗ウサギIgG（H+L）を二次抗体として使用し、標識された（緑）。1/50（0.5 μg/mL）のAPC標識hCD45モノクローナル抗体を使用して、注入した全てのT細胞を検出した（赤）。 共焦点画像は、NCGマウス脾臓に浸潤したVHH形質導入CAR-T細胞の細胞質染色を示した。形質導入されていない浸潤T細胞は、A02014でネガティブシグナルを示した。

  VHH-CAR Tが浸潤した肝臓

  

  図6 VHH形質導入CAR-T細胞が浸潤したPDXマウス肝臓組織の免疫組織化学的解析。VHHを1 μg/mL のMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No.A02014）で標識し、その後2.5 μg/mLのビオチン標識抗ウサギIgG（H+L）でインキュベーションした。最終シグナルはABC（アビジン―ビオチン複合体）キットで増幅した。肝臓組織に浸潤したVHH形質導入CAR-T細胞の膜または細胞質に陽性染色が示された。対比染色はヘマトキシリンで行った。

• VHH抗体スクリーニングまたはタイター測定

  VHHへのタグ付加に代わって、直接検出にVHH特異的な抗体を使用することは、多くのアプリケーションにおいて利点を提供できます。例えば治療アプリケーションにおいて、安全上の理由から、タグ（HisまたはFc）をVHH薬剤に付加することはできません。もしくは抗VHH抗体は、いくつかのタグエピトープに相同な内在性タンパク質との交差反応性を低下することができます。

  GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体は、重鎖抗体を特異的に認識しますが、ラクダ科血清中に見られる通常のIgG1型（図7）は認識せず、また他種への交差反応性が低くなっています（図8）。結果的に、GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体はサンプル中のVHH量を正確に検出することが可能です。

  

  図7 MonoRab™抗ラクダ科VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A01860）およびMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02014）は、ラクダ科重鎖抗体（IgG2および3）の可変ドメインに特異的である。

  

  図8 MonoRab™抗ラクダ科VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A01860）およびMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02014）は、ラクダ科IgGに特異的で、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、およびヒト免疫グロブリンに交差反応性が無い。

• VHH抗体タイター測定

  VHH薬剤開発の中で、研究者はVHHのタイトレーションを要する、薬剤の薬物動態（PK）研究を必要とします。GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体は、サンドイッチフォーマットで高感度にVHHタイターを検出できるため（図9）、血中薬剤解析での使用に理想的です。

  

  図9 VHHサンドイッチELISAの標準曲線VHHサンドイッチELISAアッセイは、MonoRab™ 抗ラクダ科VHHウサギモノクローナル抗体（Cat. No. A01860）および HRP標識MonoRab™抗ラクダ科VHH ウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02016）を、それぞれ捕捉および検出抗体として使用し、構築された。

  このELISAアッセイでは、検出抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）で標識した*。VHH検出の感度は最大39 pg/mLであった。

  * お客様のアッセイで未標識抗体が必要な場合、GenScriptのMonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテルが理想的な選択肢です（Cat. No. A02014）。GenScriptはお客様のご要望に応じて、本製品のカスタム標識サービスを提供しています。

• 末梢血単核細胞（PBMC）における、重鎖抗体発現B細胞の選択

  改変ナノボディの開発において、全IgGおよび重鎖抗体VHHは、アルパカまたはラマにターゲットタンパク質を免疫した後の免疫動物で産生されます。VHHライブラリ構築のために、抗原を免疫したアルパカまたはラマの末梢血からPBMCを単離します。

  GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体は、図10に示されるように、免疫動物の血液サンプルから単離したPBMCの検出と単離ができます。これらの抗体を使用して、研究者はフローサイトメトリーのソーティングを使用して、（重鎖抗体から）VHHを産生するPBMCをサンプルから入手でき、また抗原でPBMCをソーティングできます。その後、VHHライブラリ構築のためにRNAを抽出します。GenScriptのMonoRab™抗VHHウサギ抗体を使用することでPBMC検出の範囲を狭めることができます。

  

  図10 非免疫ラクダのVHH陽性PBMCを、2 μgのPE標識MonoRab™抗ラクダ科VHHウサギ抗体カクテル（Cat. No. A02018）を使用してフローサイトメトリーでソーティングした。図で示されたように、VHH陽性PBMCの割合は23.579%で、理論値と一致した。これは、A02018がVHH陽性PBMCに対して良好な特異性を持っていることを示した。A02018はVHH陽性PBMC単離への使用に理想的である。

関連製品

リソース

MonoRab™ 抗VHH抗体

ラクダ科／ヒト化シングルドメイン抗体検出用のユニークなツール

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VHHとは？

ラマ、アルパカ、およびラクダを含むラクダ科ファミリーのメンバーは、2種類の異なるIgG抗体を産生します。一つは通常のIgG1（分子量~150 kDa）で、二つの重鎖と二つの軽鎖で構成されています。もう一つは、軽鎖および重鎖の定常ドメインの一つ（CH1ドメイン）を欠損する、IgG2およびIgG3（分子量~90 kDa）を含んでいます。それらの抗体は一般的に重鎖抗体（HCAb）と呼ばれます。HCAbの可変ドメインはシングルドメイン抗体とされており、sdAbまたはVHHとも呼ばれます。VHHは最小の抗原結合体と考えられています。

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