HDRノックイン用テンプレート

CRISPR / Casを用いたゲノム編集技術の強力なアプリケーションの1つに、相同性指向修復（HDR）経路を介したDNA配列を正確に挿入することがあります。この挿入の際に、様々な要因が影響することが知られていますが、特に最適なHDRのテンプレートを用意することが非常に重要とされています。

GenScriptでは、CRISPR実験のゲノム編集効率を最大化するために、高品質のシーケンス検証済みHDRテンプレートを提供しています。

ノックイン用HDR テンプレート

GenExact™ ssDNA
- ✔ 150-5,000 nt
- ✔ 細胞毒性が低い ^Ref1
- ✔ 正確なノックイン, オフターゲットを最小に
- ✔ gからmgスケールまで製造可能
- ✔ 高純度でシークエンス確認済
- ✔ 研究用グレードからGMPグレードまで
GenWand™ dsDNA
- ✔ 2-10 kb
- ✔ 正確性を高めるための共有結合で閉じた末端保護 ^Ref2
- ✔ スケールアップ可能
- ✔ gからgスケールまで製造可能
- ✔ 高純度でシークエンス確認済
- ✔ 研究用グレードからGMPグレードまで

UCSF(カルフォルニア大学サンフランシスコ校)のMaronラボとの共同研究により下記のことが明らかになりました:

GenExact™ ssDNAは、自身で作成したHDRT(HDRテンプレート)より、一貫して低毒性で高いノックイン効率であることが示されました
エレクトロポレーションによるエンハンサーなしでのGenExactTM ssDNAのノックイン効率は、GMPグレードのもので46.2 %に達しました。
GenExact™ ssDNAによってノックイン陽性となった生細胞数は、患者の細胞数(100 x 106)を上回りました。また、in vitroのアッセイで、このノックイン細胞は効率的にBCMA-CAR細胞を殺すことがわかりました。

Brian R Shy. et.al., bioRxiv(2021), Read the whole article.

New Case Study

In collaboration with the Marson lab at the Gladstone-UCSF Institute of Genomic Immunology

HEK293細胞のRAB11A locusにエレクトロポレーションで5 μgのPCR dsDNAおよびGenWandTMdsDNAを用いた場合のGFPのKI効率