BacuVance バキュロウイルス/昆虫細胞発現系

高品質なタンパク質生産用の汎用性の高いシステム

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概要

GenScriptのBacuVanceバキュロウイルス/昆虫細胞発現系は、バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞からのウイルス産生とリコンビナントタンパク質発現を可能にするため、社内の専門チームによって開発されました。この発現系は、タンパク質溶解性の改善と翻訳後修飾をサポートします。また同時に複数遺伝子を発現させ、ヘテロダイマーやポリマー（例、主に5つのサブユニットを形成）を形成して、細胞内および分泌型タンパク質を高収量で産生できます。当社のハイスループットな昆虫細胞発現および精製プラットフォームは、お客様のターゲットスクリーニングプロジェクトに合わせ、スモールスケール産生にもご利用頂けます。

GenScriptはバキュロウイルス発現系を利用し、発現が困難なタンパク質、例えばキナーゼ、ウイルスターゲット、細胞表面受容体、トランスポーターなど、様々な酵素や膜タンパク質の産生をサポートすることができます。疾患と膜タンパク質の機能は、密接な関係があるため、これらのタンパク質は現在、全薬剤ターゲットの60%以上を占めています。それらの生物学的な関与にも関わらず、膜タンパク質の研究は、タンパク質の発現と精製の課題により、しばしば制限されています。膜タンパク質産生の専門家チームの支援により、GenScriptは構造的にも、また機能的にも完全性を保持した膜タンパク質の発現と精製が可能です。 BacuVance バキュロウイルス/昆虫細胞発現系は、タンパク質結晶化および構造決定アプリケーションにおける予算の有効活用と時間の節約に、お勧めいたします。

ハイライト

複雑なタンパク質に対する優れた能力

高度な発現最適化技術

大きなインサートへの対応力 >400 kDa

標準ワークフロー

タンパク質発現サービス

サービスの詳細

プロジェクトに合った、最適で可能なプロトコルを確立してからスケールアップされたいお客様には、様々な条件を探索するため、GenScriptでは高度なプラットフォームの使用をお勧めいたします。

	段階	仕様	納品物	タイムライン¹
1	遺伝子合成とサブクローニング	一つまたはそれ以上の発現ベクターへのサブクローニング	コンストラクトのレポート	2 週間
2	ウイルス生成	リコンビナントバクミドDNAの生成リコンビナントバクミドDNAによる昆虫細胞のトランスフェクション P1ストック（低力価）、P2ストック（高力価）の生成、および定量PCRによるウイルス力価の測定抗His／GSTまたは他の抗体でのウェスタンブロットによる、生成したP1およびP2のタンパク質発現を検証	5 ml, >10⁷ pfu/ml のウイルスストック	2–3 週間
3	パイロット発現評価	P2ストックでの昆虫細胞への感染ワンステップでのアフィニティ精製 SDS-PAGEとウェスタンブロット	発現データ	1.5 週間
4	1Lの発現と精製	1Lの昆虫細胞発現と精製ワンステップでの精製 SDS-PAGE、ウェスタンブロット²、LC-MS/MSカバレッジ²による品質管理	精製タンパク質品質管理データ	1–2 週間

ご注意:
1. こちらに記載の納期は、GenScriptの通常納期です。追加のご要件によって追加の手順が発生し、処理時間が伸びることがあります。（国際輸送期間によっても変動がございます）
2. LC-MS/MSカバレッジ、N末端シークエンシングやLC-MSなどの他のQCデータは、追加料金で入手頂けます。

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事例集

事例1：膜貫通タンパク質
4つの膜貫通ドメインを持つCLDN18.2
背景

CLDN18.2の産生は、多くの腫瘍の治療に重要な薬剤ターゲット。

主な課題

低発現

精製が困難
最適化

GOIのコドン最適化

発現の最適化

界面活性剤のスクリーニングと精製の最適化

6種類の界面活性剤でのスクリーニングパッケージ

全11種類の界面活性剤が利用可能

結果

最適化後 >2 mg/Lの収率

純度 >85%

EC50 < 0.03 μg/ml
- 2020年以来、膜貫通回数の異なる200種類以上のタンパク質の精製と発現、成功率85%。
- 1回、6回、7回膜貫通ドメインを持つ膜タンパク質の実績。
Hemagglutinin
(1 transmembrane domain)

LPAR1
(6 transmembrane domains)

PAQR2
(7 transmembrane domains)
事例2：高分子量タンパク質
- いくつかの高分子量タンパク質は不溶性で、通常は発現量は低レベル。
- 通常は、高分子フラグメントの挿入に対応できる、古典的な昆虫-バキュロウイルス発現系が使用される。
- Hi5細胞では、高分子量タンパク質（100 kDa）の、純度95%、10 mg/Lの発現レベルでの発現に成功。
事例3：キナーゼ
- Sf9細胞はバキュロウイルス発現に使用される従来の細胞株。発現したタンパク質を正しく折りたたむことができ、ジスルフィド結合を形成する他、外来遺伝子の大きな断片にも対応できる等、タンパク質発現と精製で多くの利点がある。
- Sf9細胞では、キナーゼの純度95%、10 mg/Lのレベルでの発現に成功。
事例4：他のタンパク質
- GenScriptは、Sf9、Sf21,Hi-5およびS2昆虫細胞株に特異的な、無料で先進的なコドン最適化を提供しており、お客様のタンパク質発現をさらに向上可能。
Virus protein

Multi-subunit complex proteins

Secretory protein