CRISPR/Cas9ゲノム編集は、その簡単さと汎用性から、広く使用されるようになりました。また、CRISPR技術はゲノム編集に加えて多様なアプリケーションにも適応しています。 遺伝子合成とゲノム編集のリーダーとして、またBroad Institute of MIT and Harvard*のFeng Zhang研究室とのパートナーシップを通じて、お客様が研究においてCRISPRゲノム編集の力を活用頂けるよう支援するため、GenScriptは検証済のCRISPR製品、サービス、およびリソースを提供しています。
「CRISPR applications page」では、①CRISPRツールボックスの概要、②一般的なゲノム編集の流れのご説明、③CRISPRアプリケーションをまとめておりますので、ぜひご覧ください。
Featured Webinar | CRISPR Based CAR-T Cell Editing: Large gene knock-ins in human T cells using non-viral HDR templates
Dr. Theo Roth from Marson Lab, UCSF introduces the advantages of a new CRISPR based method that allows for the insertion of large DNA sequences (>1Kb) in primary T cells without a virus.
Step-by-step instructions for your CRISPR knock-in experiments.
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CRISPRは「Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats」を表しています。CRISPR配列は元々、大腸菌のゲノムで同定されたもので、DNAレベルで遺伝子的寄生体をターゲットし破壊する、RNAベースの獲得免疫系の一部の機能として見つかったものです。CRISPR関連タンパク質（Cas）は外来DNAを切断するエンドヌクレアーゼで、宿主ゲノムへの組込みを可能にしています。切断は侵入したDNAのターゲット配列周辺に「protospacer adjacent motif」（PAM）がある時にのみ生じ、高精度なターゲッティングを確保しています。 CRISPRの研究者は、ターゲット宿主ゲノムの遺伝子編集の使用ツールとして使用するために、この機構を適応させました。CRISPR/Cas9は最近、その簡単さと汎用性から、人気のゲノム編集ツールとなっています。
利用可能な他の遺伝子編集技術がある中で、CRISPR/Cas9はその簡単さと有効性が際立っています。CRISPRシステムはgRNAとCas9をコードするわずかで単純なDNAコンストラクトのみ、またノックインを行う際は、HR用のドナーテンプレートを必要とします。結果的に、分子生物学の専門知識にかかわらず、CRISPR遺伝子編集はどの研究室でも受け入れられる技術となっています。以下の表はCRISPR遺伝子編集と他の一般的な技術の主な違いについて、いくつかを要約したものです。
Cas9ヌクレアーゼがターゲットDNAに誘導されると、PAM配列の3~4塩基上流に二本鎖切断が生じます。二本鎖切断の修復方法には二種類あります。ドナーDNAが存在しない場合、エラーが発生しやすい非相動末端結合（NHEJ）による分解が起こり、タンパク質機能を効果的にノックアウトするインデルが生じます。 または、ドナーDNA配列がある場合、DSBはターゲット遺伝子の正確なノックインのため、相同組換え修復（HDR）によって修復されます。
