CRISPR gRNAライブラリ

ゲノムスケールノックアウトのための、GeCKOライブラリー

ゲノムスケールCRISPRノックアウト（GeCKO）v2ライブラリーは、ヒトやマウスの細胞において、特定のフェノタイプの発生を欠失させる機能欠損変異の迅速なスクリーニングに有用です。GenScriptは、Broad Instituteからのライセンスに基づき、Feng Zhang研究室で開発された8種類のGeCKO v2 CRISPRライブラリーを提供しています。* このライブラリーは、ヒトおよびマウスのゲノムDNAの遺伝子およびmiRNAをターゲットとする各種gRNAをプールしたものです。GeCKO v2ライブラリーにはコントロールとしてnon-targeting gRNAも含まれており、さらに高力価レンチウイルスを産生するために最適化されたレンチウイルスベクターを使用することで、初代培養細胞へのトランスフェクション効率を向上させています。GeCKOライブラリーは、ヒトやマウスの初代培養細胞、幹細胞、癌細胞、安定発現細胞株において使用されています。さらに、様々な条件下における細胞の生存に必須となる遺伝子や、癌細胞の薬物耐性機能の発現に関与する遺伝子の同定も可能です。 GeCKOv2ライブラリーのデザインや構築に関する詳細については、こちらをご覧ください：Sanjana N.E., Shalem O., Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug;11(8):783-4. doi: 10.1038/nmeth.3047.

GeCKO v2ライブラリーはAとB が各1/2で構成されているライブラリーで、1遺伝子当たり3個のgRNAが含まれています。両ライブラリーにはコントロールとして1000個のnon-targeting sgRNAが含まれています。また、AライブラリーにはmiRNAをターゲットとするgRNA（4 sgRNAs/miRNA）も含まれています。全ライブラリーをカバーするために両者を同時に購入して頂くことは可能ですが、その場合はより多くの細胞は必要になるため、最初はAライブラリーでのスクリーニングをお奨めします。

ライブラリー詳細

GenScriptのgRNAライブラリーはIndustrialグレードとなります。ライブラリーの追加オプションなどに関しては、お問い合わせください。

GeCKOライブラリ納品物

• 25 µgに分注された（Industrialグレード）プールライブラリーです。カタログ製品として100 µg（4 x 25 µg） および200 µg（8 x 25 µg）があり、製品にはテクニカルガイド、MSDS、COA（分析証明書）が添付されます。
• マウスGeCKOライブラリーA （デュアルベクター）: 100 µgのプールライブラリー（Researchグレード）
• 100 µg単位で、最大900 µgまでスケールアップ可能です。Researchグレードの代わりに、Industrialグレードでも製造できます。
• 最終プロジェクトレポートには、サンガーシークエンシングによるABIファイル、およびNGSテストによる統計概要が記載されています。ご希望に応じて、NGSの生データも提供いたします。

GeCKOライブラリーの使用方法

GeCKOライブラリーは、ゲノムの全遺伝子およびmiRNAをターゲットするCRISPRガイドRNAをプールしたのものです。各gRNAは、高力価ウイルスを産生するよう最適化されたレンチウイルスベクターにクローニングされ、プライマリー細胞または培養細胞株への効率的な形質導入にご利用可能です。 さらに読む »

CRISPR 転写活性化SAMライブラリー

SAMライブラリーは、ゲノムワイドな機能獲得スクリーニングにおいて強力な転写活性化を誘導します。

SAMライブラリーは、ゲノム中の各コード領域に対して強力かつ特異的な転写活性化を誘導することで、ヒト細胞での機能獲得スクリーニングが可能です。CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator（SAM）は、内在性遺伝子の転写機能を強力に活性化するように設計されたタンパク質複合体です。CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator（SAM）は、内在性遺伝子の転写機能を強力に活性化するように設計されたタンパク質複合体です。SAMは、ガイドRNAによりゲノム中の特定の座位をターゲットするCas9ヌクレアーゼの特異性とリプログラミングのしやすさを利用しています。SAM複合体は3つの転写活性化ドメイン（VP64、P65、HSF1）を含んでおり、転写開始位置の200 bp上流内の部位をターゲットし転写を活性化します。SAMシステムは、切断活性を無くしたCas9を使用しており、内在性ゲノムのＤＮＡ鎖が切断されないことを確認しています。

ヒトのゲノムワイドSAMライブラリーは、RefSeqデータベース（23,430種のアイソフォーム）にある既知のコーディングアイソフォームすべてを活性化することができるため、遺伝子の活性化による機能獲得スクリーニングに有用です。このライブラリーは、ヒトおよびマウスの初代培養細胞、幹細胞、癌細胞、安定型発現細胞におけるスクリーニングに使用されています。SAMライブラリーを使用することにより、様々な条件下で細胞の生存に必須となる遺伝子や、癌細胞において薬剤耐性能を生じる遺伝子などを同定することが可能です。

SAMライブラリのデザインや構築に関する詳細は、以下の文献をご覧ください。Konermann S*, Brigham MD*, Trevino AE, Joung J, Abudayyeh OO, Barcena C, Hsu PD, Habib N, Gootenberg JS, Nishimasu H, Nureki O & Zhang F. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, doi:10.1038/nature14136。

SAMライブラリーの内容物

• 70,290種類のgRNA配列： ヒトゲノム中の23,430種のユニークコーディングアイソフォームをターゲティングする各3種のsgRNA genome。
• Human SAM gRNA library is cloned into pLenti sgRNA(MS2)_zeoベクター骨格にクローニングされた、ヒトSAM gRNAライブラリー。
• ライブラリーには、同時導入する必要がある、 pLenti dCas-VP64_Blast および pLenti MS2-P-HSF1_Hygro プラスミドが添付されています。

SAMライブラリー納品物

すべてのSAMライブラリーは Industrial グレードとなります。発注量を増やすことも可能です。ライブラリーの追加オプションなどに関しては、お問い合わせください。

機能獲得スクリーニングにおけるSAMライブラリーの使用法

SAMライブラリーは、ゲノムの転写開始点に隣接する上流域をターゲットとする各種CRISPR gRNAをプールしたものです。SAMによる機能獲得遺伝子のスクリーニングには、ヒトのゲノムワイドSAM sgRNAライブラリーの他に、2種類（dCas9-VP64およびMS2-P-HSF1）のSAM複合体を組み合わせて使用する必要があります。　 さらに読む »

パスウェイに関するCRISPR gRNAライブラリー

パスウェイＣＲＩＳＰＲ gRNAライブラリーは、重要な特定のパスウェイのターゲットスクリーニングに最適なツールです。Drug Gene Interactionデータベースで同定された遺伝子ターゲットを使用してデザインされ、パスウェイや疾患関連遺伝子を対象にスクリーニングすることができます。全てのgRNA配列はBroad Research Instituteによって事前デザインと検証がされています。ライブラリーはＩｎｄｕｓｔｒｉａｌグレードで届けられ、レンチウイルスパッケージングにすぐ使用できます。ライブラリーでカバーされるgRNA配列に関する情報は、ライブラリーのハイパーリンクをクリックしてください。