IVT mRNAおよび環状RNAカタログ製品

eGFP mRNAはクラゲAequorea victoria由来のオープン リーディング フレーム配列を持つ強化された緑色蛍光タンパク質を発現します。EGFP mRNAはmRNA療法および送達システムの開発プロジェクトにおいて一般的に使用される蛍光レポーター配列です。発現されたタンパク質の Ex/Em 波長は 488nm および 507nm です。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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細胞での発現結果

実験方法の概要：メーカーの指示に従って、96 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 0.5 μL のlopofectamine 2000 (または同等品) を使用して、0.2 μg の mRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、16から24時間後にプレートリーダー、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡を使用して結果を確認した。装置の設定には、励起波長485 nm、蛍光波長535 nmを使用。

A. A549細胞におけるeGFP mRNAの発現。lipofectamine 2000によるトランスフェクション後のA549細胞の共焦点顕微鏡での観察の結果 eGFP mRNAの効率的な発現が、確認された。緑：eGFPタンパク質、青：核 B. LC-MSによるeGFP mRNAのキャッピング効率評価。Cap付きeGFP mRNA断片のM/Zは8473、未CapのmRNA断片のM/Zは8116であった。Capフラグメント率は99.5%であった。

A549細胞におけるeGFP mRNAの発現。lipofectamineによるmRNAトランスフェクション24時間後のeGFP発現を、プレートリーダーで測定した。N1-メチルシュードウリジン修飾EGFP mRNAをコントロールとして使用した。

eGFP 環状RNA (circ RNA) はクラゲAequorea victoria由来のオープン リーディング フレーム配列を持つ強化された緑色蛍光タンパク質を発現します。EGFP 環状RNAはmRNA療法および送達システムの開発プロジェクトにおいて一般的に使用される蛍光レポーター配列です。発現されたタンパク質の Ex/Em 波長は 488nm および 507nm です。

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細胞での発現結果

実験方法の概要：メーカーの指示に従って、96 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 0.5 μL のlopofectamine 2000 (または同等品) を使用して、0.2 μg の mRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、16から24時間後にプレートリーダー、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡を使用して結果を確認した。装置の設定には、励起波長485 nm、蛍光波長535 nmを使用。

Equal molar of circular EGFP RNA or linear eGFP mRNA (N1-methyl-pseU) were transferred into A549 cells using lipofectamine messengerMax, and the protein expression of eGFP was detected by flow cytometry, linear mRNA has constant protein expression level over 3 days, but circular RNA observed ~3.5 folds higher expression per well than mRNA after 3 days.

Firefly-Luciferase (F-Luc) 環状 (circ) RNAは、ホタルおよびコメツキムシの生物発光用酵素であるホタルルシフェラーゼタンパク質を発現します。細胞または動物へ効率的な導入された後に、F-Luc circRNAはF-Lucに翻訳され、基質であるルシフェリン存在下で生物発光を放出します。

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細胞での発現結果

Equal molar of circular Fluc RNA or linear FLuc mRNA (N1-methyl-pseU) were transferred into A549 cells using lipofectamine messengerMax, and the protein expression of firefly luciferase was detected by luciferase assay, after 24 hours. Circular RNA observed ~2 folds higher expression per well than mRNA after 1 day.

eSpCas9 mRNAは、Slaymakerらによって2015年にScienceで最初に報告された配列から、特異性が増強されたCas9タンパク質を発現します。特異性増強版の化膿レンサ球菌Cas9ヌクレアーゼは、堅牢なオンターゲットゲノム編集効率を維持しつつ、オフターゲット効果を10倍以上低減します。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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細胞での発現結果

実験方法の概要： メーカーの指示に従って、6 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 5 μL のLipofectamine™ MessengerMAX™ トランスフェクション試薬(または同等品) を使用して2.5 μgのmRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、48時間後に、プレートリーダー、またはフローサイトメトリーで結果を確認した。装置の設定には、励起波長560 nm、蛍光波長620 nmを使用した。

A549細胞中のeSpCas9 mRNAの発現。eSpCas9の発現はトランスフェクションの48時間後に、ELISAで測定した。.T：T社のeSpCas9 mRNA、A：A社のeSpCas9 mRNA、GS：GenScriptのeSpCas9 mRNA

SB-100 mRNAは、Jin Zらによって2011年のGene Therapyで最初に報告された配列から、Sleeping Beautyトランスポサーゼを発現します。Sleeping beautyトランスポゾンおよびトランスポサーゼは、治療用ヒト細胞遺伝子工学に使われるDNAプラスミドシステムを構成しています。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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eGFP 発現mRNA を搭載する 4 つのカタログ RNA_LNP 製品を提供しています:

• EGFP mRNA (m1Ψ) - SM102 LNP
• EGFP mRNA (5MOU)-SM102 LNP
• EGFP mRNA (m1Ψ) – LP01 LNP
• EGFP mRNA (m1Ψ) – ALC0315 LNP

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eGFP mRNA（m1Ψ）を載せた SM102 LNP製剤は、主なイオン化脂質 SM102 を用いたジェネリックLNP 製剤で調製されています。ペイロードの EGFP mRNA（m1Ψ）は、U ベースを 100％N1-メチルシュードウリジンで修飾しています。ジェリーフィッシュ、Aequorea Victoria 由来のオープンリードフレーム配列を持つ、増強型緑色蛍光蛋白質を発現します。EGFP mRNA は mRNA 治療法および送達システム開発プロジェクトで一般的に使用される蛍光レポーター配列です。発現された蛋白質は励起波長 488nm、発光 507nm です。この製剤は、体外および体内実験モデルでご研究中のmRNA 製品に対して SM102LNP 製剤の効果をテストするための良いコントロールです。

細胞での発現結果： GenScript LNP-SM102、Lipofectamine™ MessengerMAX™、または Mirus TransIT-Jurkat Transfection Reagent を用いて eGFP mRNA を A549 細胞、Hela 細胞、 Jurkat 細胞に転染するための転染効率を比較しました。各細胞の 24 ウェルプレートの各ウェルに 100ng または 200ng の mRNA を転染し、リポフェクトアミンおよび TransIT には製造元の指示に従ってスターダートメディウム（OptiMEM）を使用し、LNP には完全な培养基を使用しました。48 時間後、フローサイトメトリーを用いて eGFP の表現を測定しました。LNP は、他の転染キットと比較して、in vitro での免疫細胞への転染効率が高いです。

Firefly luciferase mRNAを載せた2 つのカタログ RNA_LNP 製品を提供しています:

• FLuc mRNA (m1Ψ) - SM102 LNP
• FLuc mRNA (m1Ψ) – ALC0315 LNP

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Firefly luciferase mRNA（m1Ψ）を載せたSM102 LNP 製剤は、主なイオン化脂質が SM102 である一般的なLNP 製剤を使用して調製されます。ペイロードの Fluc mRNA（m1Ψ）は、U ベースのすべてが 100％N1-メチルシュードウリジンで修飾されています。F-Luc mRNA は、 substratue であるルシフェリンの存在下で F-Luc を翻訳し、生物発光を発します。Fluc mRNA は、mRNA 治療法および送達システム開発プロジェクトで一般的に使用される蛍光報告シークエンスです。この製剤は、体外および体内実験モデルでご研究中のmRNA 製品に対して SM102LNP 製剤の効果をテストするための良いコントロールです。

動物実験での結果：Genscriptは、2 種類のLNP 製剤を使用して、Balb-Cマウスに Fluc mRNA（100％N1-メチルシュードウリジン修飾、GenScript）を 0.3mg/kg の用量で IV 注射して送達効率を比較しました。fluc mRNA の発現は、マウスの背側および腹側の姿勢でのイメージングによって全身生物発光イメージングで測定されました。SM102-LNP で送達された Fluc-mRNA は、8 時間および 48 時間後にマウスの両方の背側および腹側の姿勢でのイメージングで、MC3 よりも高い発現効率を示しました。異なる製剤の生物分布プロファイルを評価するために、48 時間後、マウスの心臓、肝臟、肺、脾臓、腎臓、脳を収集してイメージングしました。48 時間後、SM102 -LNP は MC3-LNP と比較して肝臓蓄積が強く、MC3 LNP は 48 時間後に脾臓蓄積が強く示されました。

Gaussia-Luciferase（G-Luc）circRNA は、海洋コケホオドル、ガウシア・プリンスプスからの 20 kDa の生物発光酵素であるガウシアルシファーゼラス発現タンパク質。効率的に細胞または動物体内に送達された後、G-Luc circRNA は細胞培养液または体液中に分泌される生物発光酵素 G-Luc に翻訳され、 substratue の存在下で生物発光をを放出します。

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細胞での発現結果：

円形の Gluc RNA または線形の GLuc mRNA（N1-メチルシュードウリジン）の等モルをLipofectamine™ MessengerMAX™を使用して A549 細胞に転移し、Pierce Gaussia ルシファーゼラスグローアッセイキットでガウシアルシファーゼラスタンパク質の発現を検出しました。

eSpCas9 mRNA（m1Ψ）と TRAC sgRNA を載せた ALC0315 LNP 製剤は、主なイオン化脂質が ALC0315 である一般的なLNP 製剤を使用して調製されます。ペイロードの eSpCas9 mRNA（m1Ψ）は、すべての U ベースが N1-methyl-pseudo-Uridine で 100％修飾されています。TCRα 遺伝子（TRAC）の定数鎖の最初のエクソンを標的とする修飾を備えた HPLC 精製 SafeEdit sgRNA は、TCR 遺伝子の内在的な転写制御を利用して CAR-T 細胞の効力と持続性を高めます。このLNP 製剤では、eSpCas9 mRNA と TRAC sgRNA は質量比 1:1 でロードされます。

この製剤は、体外および体内実験モデルでご研究中のmRNA 製品に対してALC0315LNP 製剤の効果をテストするための良いコントロールです。

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eSpCas9 mRNAは、Slaymakerらによって2015 Dec 1.にScienceで最初に報告された配列から、特異性が増強されたCas9タンパク質を発現します。特異性増強版の化膿レンサ球菌Cas9ヌクレアーゼは、堅牢なオンターゲットゲノム編集効率を維持しつつ、オフターゲット効果を10倍以上低減します。

細胞での発現結果：

円形の eSpCas9 RNA または線形の eSpCas9 mRNA（N1-メチルシュードウリジン）の等モル量をLipofectamine™ MessengerMAX™を使用して A549 細胞に転移し、eSpCas9 のタンパク質発現を ELISA 法で検出しました。

Cpf1 は新しいタイプの CRISPR-Cas DNA エンドヌクレアーゼです。LbCpf1/Cas12a はゼブラフィッシュと Xenopus で効率的な突然変異を許可します（Moreno-Mateos 等、Nat Communication、2017; 8: 2024）。LbCpf1 はホモロジー指向ゲノム編集を増加させます。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンで100%、置換しています。

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Prime editing（PE）システムは、少なくとも2つの成分からなります。工学的に設計された逆転写酵素と融合したプログラム可能なDNAニッケザーとpegRNAです。PE2/PE3 mRNAシークエンスは Nelson らによって Nat Biotechnology、2022；40：402-410. から得られています。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンで100%、置換しています。

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PiggyBac は DNA トランスポゾンであり、Sleeping Beauty の有望な代替品です。PiggyBac は元々キャベツの輪切り虫ゲノムから分離され、正確に切り出す能力で区別されます。（Zheng Zhang等、J Comput Biol 2000; 7（1-2）：203-14.）

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンで100%、置換しています。

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オバルブミンは卵白に見られる主要な蛋白質です。テスト対象者にアレルギー反応を誘発するために一般的に使用される抗原です。また、生物化学でセリン構造と機能の研究に広く使用されています。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンで100%、置換しています。

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このSpike mRNA シークエンスは、合成構造物 HCV1145 Moderna（mRNA-1273）ワクチンシークエンスです。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンで100%、置換しています。

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