自己増幅型RNA (saRNA) 合成サービス

最適なパフォーマンスのために、カスタムデザインと修飾のsaRNAを受注生産するリーディングサプライヤ

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ワクチン開発の最前線を開拓

自己増幅型RNA (saRNA) はレプリカーゼをコードし、細胞内で元のRNA鎖を複製するmRNAの一種です。saRNAは直鎖状の一本鎖RNAで、5′ cap、3′ polyA tail、5′と3′の非翻訳領域 (UTR) を持つなど、従来のmRNAと多くの構造的類似点がありますが、従来のmRNAとは異なり、低用量で副作用が少なく、ワクチンの効果を長期間持続させる有望なツールとして期待されています。

GenScriptは、カスタムデザインと修飾のsaRNAを受注生産する最初のサプライヤーの1つとして、信頼性の高い品質の製品をご提供し、お客様の革新的な研究プロジェクトの加速をお手伝いできることを誇らしく思います！

SaRNA合成フォーマットをご記入の上で、メールでのお見積りやお問い合わせも承っております。

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IVT RNAサービス

saRNAの強み

最適化製造のマーケットリーダー

直ちに使用可能なテンプレート（特許出願済み）と完全に最適化された製造プロセス

増強＆持続する発現

より低用量のRNAで強く持続的な発現を実現

多様なアプリケーションに
最適化されたベクター

用途に応じて免疫原性の異なるベクターを利用可能

saRNAの作用機序

異なるタイプのIVT RNAの比較

	直鎖状mRNA	自己増幅型RNA	環状RNA

構造	直鎖状で、5'末端と3'末端が露出するエキソヌクレアーゼによる分解を受け易い	直鎖状で、5'末端と3'末端が露出するエキソヌクレアーゼによる分解を受け易い	閉じた環状構造で、遊離した5‘末端や3’末端が無いエキソヌクレアーゼによる分解を受け難い
リボソームの動員	5’ Capが翻訳開始に寄与し、mRNAを安定化させる	5’ Capが翻訳開始に寄与し、mRNAを安定化させる	IRES (Internal Ribosome Entry Site) が翻訳開始に寄与する
ORF	コドンの最適化によりタンパク質発現が増強される塩基修飾 (M1Ψなど) に対応 20kb以下のインサートに対応	コドンの最適化によりタンパク質発現が増強される塩基修飾 (M5Cなど) に対応 6kb以下のインサートに対応	コドンの最適化によりタンパク質発現が増強される 4kb以下のインサートに対応
UTR	5‘と3’のUTR構造はmRNAの安定性や翻訳促進に寄与	mRNAの自己複製を促進するレプリコンを含む	IRES、PIE、およびその他エレメントを含む
PolyA tail	RNA分子の分解を抑制し、安定化する	RNA分子の分解を抑制し、安定化する	不要
タンパク質発現	+++ Strong	+++++ Strongest	++++ Stronger
発現の半減期	+++ Shorter	+++++ Longest	++++ Longer
免疫原性	++++ Low	++ High	+++ Medium
必要投与量	++ High	+++++ Lowest	+++ Medium
新規性	+++ Traditional	++++ Novel	+++++ Novel

サービス

コドン/UTR
最適化

タンパク質発現を増強するコドンの最適化を日常的に提供
200以上の因子をスクリーニングしたコドンの最適化 (特許)

遺伝子
合成

100 bp ～ 6 kbの遺伝子インサートの合成
最速で6 ～ 14営業日の作業期間
Poly (A) を組み込んだベクターへの遺伝子挿入

クローニング/プラスミド
合成

直ちにIVTに使用できる直鎖化プラスミドDNAを調製
ベクターにコードされるPoly (A) 領域は安定で、ばらつきは僅か±5～10nt程度

SaRNA
合成

RUOグレードのカスタムsaRNA合成サービス
追加精製と多様なQCオプション

脂質ナノ粒子 (LNP)
パッケージ

ジェネリックイオン性脂質製剤
1～30mgのsaRNAをパッケージング

お客様のプロジェクトのニーズを満たすためのカスタムsaRNA合成サービス

迅速な納品 ― 最短3週間
対応可能なインサート長 ― 100 bp～6 kb
バッチスケール ― 100 μg～200 mg

様々な用途に最適化されたベクター

Vector Name	Capping type	Modification	Application
GS-saRNA-1	Cap-AU	m5C or none	遺伝子補充療法用に設計された低免疫原性ベクター
GS-saRNA-2	Cap-AG	m5C or none	がん免疫療法やワクチン用に設計された高免疫原性ベクター

品質管理と仕様

QC	Item	Test Method	Specification
Identification	Appearance	Visual inspect	Clear and free of foreign particles
	RNA length	Capillary electrophoresis	Target ± 30%
	RNA length	Agarose gel electrophoresis	Expected size band detected
	Poly(A) length	Enzyme digestion and CE	Target ± 30%
	RNA content	UV absorbance	Target ± 5%
	PH	pH meter	Target ± 0.5
	Buffer specification	Client spec	N/A
Purity	A 260/280 ratio	UV spec	1.70 ~ 2.30
	Capping efficiency	LC-MS	≥ 90%
	Size-based purity	Capillary electrophoresis	≥ 70%
Safety	Endotoxin	Semiquantitative	< 10 EU/mg

事例

LNPトランスフェクションを用いたHEK293T細胞におけるsaRNAの高発現

100ngのGS-saRNA-1、GS-saRNA-2ベクターを用いて作製したGenScriptのeGFP saRNA（未修飾）と、他社のeGFP saRNAを、Lipofectamine MessengerMAX（Thermo Fisher）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの 24 時間後と 48 時間後に eGFP 発現を蛍光顕微鏡で観察し、マイクロプレートリーダーで解析した。
saRNAは直鎖状RNAや環状RNAに比べて高発現を示す

HEK293T細胞に、LNPに封入したEGFPをコードする直鎖状mRNA (200ng)、環状mRNA (200ng)、samRNA (100ng) をトランスフェクションしたところ、samRNAをトランスフェクションした細胞で有意に高レベルのEGFPの発現がみられた。samRNAと直鎖状mRNAや環状mRNAの質量比は1/2であるが、モル比は1/5であることに注意が必要である。
GenScriptが設計したGluc saRNAはお客様が設計したものより高発現を示した

GS-saGluc (GenScript：GenScriptがGS-saRNA-1 vectorを用いて調製したもの。5-メチルシトシン修飾済み) と、お客様が設計したsaGluc (Client) の発現を比較した。その結果、GS-saGLucはお客様が設計したsaGLucよりも高い初期発現と持続発現 (10倍以上) を示した。左：トランスフェクション後、12、24、48、96、144時間におけるルシフェラーゼ活性。右：お客様のデザインしたsaRNAに対するGlucの発現比 (Fold change)。
GenScriptのsaRNAは、他社の最適化されていないsaEGFPと比較して、より高い純度と細胞発現、より低い免疫原性を示した

左：Agilent 5200 キャピラリー電気泳動で検出したGenScriptと他社のsaRNAの完全性。

中央：100ngのGS-saRNA-1、GS-saRNA-2ベクターを用いて作製したGenScriptのeGFP saRNA（未修飾）と、他社のeGFP saRNAを、Lipofectamine MessengerMAX（Thermo Fisher）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの 24 時間後と 48 時間後に eGFP 発現を蛍光顕微鏡で観察し、マイクロプレートリーダーで解析した。

右：異なるeGFP saRNAをトランスフェクションしたA549細胞におけるIL6レベルをELISAで検出した。