蛍光標識ペプチドのアプリケーション

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概要

蛍光タグまたはプローブは、多くのイメージングおよび診断アプリケーションで使用されています。蛍光ペプチドのアプリケーションはin vivoバイオメディカルイメージング研究、局在研究、ペプチド－タンパク質相互作用、酵素活性アッセイ、または新規疾患モデル開発など多岐にわたります。蛍光色素標識ペプチドは、蛍光顕微鏡またはその他の蛍光イメージング技術で検出/可視化されます。蛍光色素はN末端またはC末端に共有結合が可能ですが、N末端への修飾が推奨されています。また、ビオチン化アミノ酸を使用して間接的に標識することも可能です。FRETペアは、アクセプターとクエンチャーで構成され、内側あるいは外側に付けることができます。配列が長い場合、FRETペアは内側へ付けることが推奨されます。

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ペプチドの蛍光修飾

ジェンスクリプトではペプチド用に数多くの蛍光タグを提供しており、さらに継続してレパートリーを拡充しています。以下のリストは弊社の蛍光修飾の一部になります。

名称	励起波長（nm）	蛍光波長（nm）	蛍光色	Application Fields
7-Methoxycoumarin-4-acetic acid	328	393	青	In vitroイメージング細胞内局在共焦点顕微鏡フローサイトメトリー
FITC-Ahx	494	521	緑
FAM	495	520	緑
Cy3	555	570	黄
5-Carboxytetramethylrhodamine (TMR)	542	568	オレンジ
Cy5	646	662	赤
Cy5.5	673	707	近赤外	In vitroイメージング細胞内局在 In vitro光学イメージング血管造影
Cy7	750	773	近赤外	In vitroイメージング細胞内局在 In vitro光学イメージング血管造影

FRETペア

蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）は、2つの蛍光色素の間でのエネルギー移動を特徴とするメカニズムです。FRET効率はドナーおよびアクセプター分子間の距離に基づくため、この手法は一般的に酵素反応効率、タンパク質間相互作用、またはその他分子力学の研究に使用されます（図1）。

図1. プロテアーゼ研究におけるFRETのメカニズム。インタクトなままのペプチドは、アクセプター分子がドナー分子を消光し、蛍光は検出されない。配列がプロテアーゼ活性によって切断されると、アプセプターはドナーを消光できず、蛍光シグナルが検出される。

以下は最も一般的に使用されるFRETペアです：

ドナー			アクセプター
名称	励起波長（nm）	蛍光波長（nm）	名称	励起波長（nm）	蛍光波長（nm）
Cy2	490	510	Cy3	555	570
FITC	494	521	TRITC	557	576
FAM	495	520	Cy3	555	570
FAM	495	520	Texas Red	589	615
FAM	495	520	Cy5	646	662
Cy3	555	570	Cy5	646	662
EDANS	335	493	DABCYL	453	-
Glu(EDANS)-NH2	335	493	DABCYL	453	-
MCA	328	393	DNP	348	-
Abz	330	420	DNP	348	-
Abz	330	420	Tyr (3-NO2)	360	-