IVT mRNAおよび環状RNAカタログ製品

eGFP mRNAはクラゲAequorea victoria由来のオープン リーディング フレーム配列を持つ強化された緑色蛍光タンパク質を発現します。EGFP mRNAはmRNA療法および送達システムの開発プロジェクトにおいて一般的に使用される蛍光レポーター配列です。発現されたタンパク質の Ex/Em 波長は 488nm および 507nm です。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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細胞での発現結果

実験方法の概要：メーカーの指示に従って、96 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 0.5 μL のlopofectamine 2000 (または同等品) を使用して、0.2 μg の mRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、16から24時間後にプレートリーダー、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡を使用して結果を確認した。装置の設定には、励起波長485 nm、蛍光波長535 nmを使用。

A. A549細胞におけるeGFP mRNAの発現。lipofectamine 2000によるトランスフェクション後のA549細胞の共焦点顕微鏡での観察の結果 eGFP mRNAの効率的な発現が、確認された。緑：eGFPタンパク質、青：核 B. LC-MSによるeGFP mRNAのキャッピング効率評価。Cap付きeGFP mRNA断片のM/Zは8473、未CapのmRNA断片のM/Zは8116であった。Capフラグメント率は99.5%であった。

A549細胞におけるeGFP mRNAの発現。lipofectamineによるmRNAトランスフェクション24時間後のeGFP発現を、プレートリーダーで測定した。N1-メチルシュードウリジン修飾EGFP mRNAをコントロールとして使用した。

eGFP 環状RNA (circ RNA) はクラゲAequorea victoria由来のオープン リーディング フレーム配列を持つ強化された緑色蛍光タンパク質を発現します。EGFP 環状RNAはmRNA療法および送達システムの開発プロジェクトにおいて一般的に使用される蛍光レポーター配列です。発現されたタンパク質の Ex/Em 波長は 488nm および 507nm です。

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細胞での発現結果

実験方法の概要：メーカーの指示に従って、96 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 0.5 μL のlopofectamine 2000 (または同等品) を使用して、0.2 μg の mRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、16から24時間後にプレートリーダー、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡を使用して結果を確認した。装置の設定には、励起波長485 nm、蛍光波長535 nmを使用。

Equal molar of circular EGFP RNA or linear eGFP mRNA (N1-methyl-pseU) were transferred into A549 cells using lipofectamine messengerMax, and the protein expression of eGFP was detected by flow cytometry, linear mRNA has constant protein expression level over 3 days, but circular RNA observed ~3.5 folds higher expression per well than mRNA after 3 days.

Firefly-Luciferase (F-Luc) 環状 (circ) RNAは、ホタルおよびコメツキムシの生物発光用酵素であるホタルルシフェラーゼタンパク質を発現します。細胞または動物へ効率的な導入された後に、F-Luc circRNAはF-Lucに翻訳され、基質であるルシフェリン存在下で生物発光を放出します。

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細胞での発現結果

Equal molar of circular Fluc RNA or linear FLuc mRNA (N1-methyl-pseU) were transferred into A549 cells using lipofectamine messengerMax, and the protein expression of firefly luciferase was detected by luciferase assay, after 24 hours. Circular RNA observed ~2 folds higher expression per well than mRNA after 1 day.

eSpCas9 mRNAは、Slaymakerらによって2015年にScienceで最初に報告された配列から、特異性が増強されたCas9タンパク質を発現します。特異性増強版の化膿レンサ球菌Cas9ヌクレアーゼは、堅牢なオンターゲットゲノム編集効率を維持しつつ、オフターゲット効果を10倍以上低減します。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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細胞での発現結果

実験方法の概要： メーカーの指示に従って、6 ウェル プレートの 1 ウェルの細胞に対して 5 μL のLipofectamine™ MessengerMAX™ トランスフェクション試薬(または同等品) を使用して2.5 μgのmRNA をトランスフェクトさせた。トランスフェクション後、48時間後に、プレートリーダー、またはフローサイトメトリーで結果を確認した。装置の設定には、励起波長560 nm、蛍光波長620 nmを使用した。

A549細胞中のeSpCas9 mRNAの発現。eSpCas9の発現はトランスフェクションの48時間後に、ELISAで測定した。.T：T社のeSpCas9 mRNA、A：A社のeSpCas9 mRNA、GS：GenScriptのeSpCas9 mRNA

SB-100 mRNAは、Jin Zらによって2011年のGene Therapyで最初に報告された配列から、Sleeping Beautyトランスポサーゼを発現します。Sleeping beautyトランスポゾンおよびトランスポサーゼは、治療用ヒト細胞遺伝子工学に使われるDNAプラスミドシステムを構成しています。

このmRNAは、翻訳を促進せるためにCap1構造を付加しており、また成熟mRNAを模倣するために100AのPoly (A) テールを付加して設計されています。免疫原性と毒性を軽減させる目的で、N1-メチルシュードウリジンまたは5-メトキシウリジンで100%、置換しています。

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